基因重组技术ppt课件

发布时间:2013-05-21

课件大小:1.53 MB

所属栏目:医药类

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课件等级:基因重组技术ppt课件推荐等级为3星

简略标题:基因重组技术

应用环境:应用于多媒体教学

制作使用软件:PowerPoint

应用阶段:特种医学

基因重组技术ppt课件介绍及下载


基因重组技术ppt课件内容预览:3基因重组技术3.1概述3.1.1定义别称:基因工程(Gene engineering)DNA重组(DNA recombination)遗传工程(Genetic engineering)基因操作(Gene manipulation)基因克隆(Gene cloning)分子克隆(Molecular cloning)……目的基因的分离;重组载体的选择和制备;目的基因与载体的重组;重组体导入受体细胞;重组克隆的筛选与鉴定;目的基因在受体细胞中的表达及表达产物的分离纯化。ppt3基因重组技术3.1概述3.1.2基因重组技术的主要内容和步骤基因重组技术的主要内容分离重组转化表达筛选载体基因重组技术的主要步骤定义是一类以环状或线性双链DNA为底物,能识别DNA中特定核苷酸序列,并在合适反应条件下使每条链的一个磷酸二酯键断开,产生具3’-OH和5’-P基团DNA片段的内脱氧核苷酸酶(endo-deoxyribonuclease)。简称限制性内切酶、限制酶、内切酶。3基因重组技术3.2基因重组技术的工具酶3.2.1限制性核酸内切酶(Restriction endonuclease)——分子剪刀三种核酸限制性内切酶的主要特性比较识别序列定义限制性核酸内切酶在双链DNA分子上能识别的特定核苷酸序列。又称为识别位点、靶位点或切割位点。长度4、5、6或7个核苷酸。结构特点具有双重旋转对称结构,即:回文结构(palindromic sequence)。切割方式已知大多数II型限制性核酸内切酶在其识别序列内部切割双链DNA,水解磷酸二酯键中的3’位的酯键,产生3’端为羟基、5’端为磷酸基团的片段。切割后形成3种不同末端结构的DNA片段:在识别序列的对称轴上同时切割,形成平头末端(blunt end),如HaeIII;在识别序列的双侧末端切割,若于对称轴的5’末端切割,可产生5’端突出的末端,如EcoRI;在识别序列的双侧末端切割,若于对称轴的3’末端切割,可产生3’端突出的末端,如PstI。任何一种II型酶产生的两个突出末端,都能在适当温度下,退火互补,因此这种末端称为黏性末端(cohesive end)。平头末端5’粘性末端3’粘性末端限制性核酸内切酶在基因重组中的用途1.分割基因组DNA;2.获得分子重组所必需的末端;限制性内切酶在基因工程中的用途定义:能催化双链DNA分子中相邻的5’-P与3’-OH之间形成磷酸二酯键的酶。活性:封闭缺口(nick),不能封闭裂口(gap)。3基因重组技术3.2基因重组技术的工具酶3.2.2 DNA连接酶(DNA ligase)——分子浆糊两种DNA连接酶比较T4DNA连接酶在基因重组中的用途补缺口平头末端连接粘性末端连接磷酸二酯法合成寡核苷酸磷酸三酯法合成寡核苷酸固相亚磷酸三酯法合成寡核苷酸3基因重组技术3.3目的基因的分离3.3.1基因的化学合成局限性:目前,化学合成寡核苷酸片段的能力一般局限于150~200bp以内。然而,绝大多数基因的大小都超过了这个范围。因此,需要一种特殊的程序,才能够把合成的寡核苷酸片段构建成完整的基因。寡核苷酸片段组装基因的方式基因的组装:按设计要求用许多寡核苷酸片段装配成完整基因的过程。第一种方法是先将寡核苷酸激活,带上必要的5’-P基团,然后再与相应的互补寡核苷酸片段退火,形成带有粘性末端的双链寡核苷酸片段。把这些双链寡核苷酸片段混合在一个试管中,加上T4DNA连接酶,使它们彼此连接组成一个完整的基因或者是基因的一个片段。
课件关键字:基因重组技术,基因,重组,技术。
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