多聚酶链式反应扩增DNA片段课件ppt

  • 发布时间:2014-01-07
  • 课件大小:529 KB
  • 所属栏目:高二生物
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  • 课件等级:多聚酶链式反应扩增DNA片段课件ppt推荐等级为3星
  • 简略标题:多聚酶链式反应扩增DNA片段
  • 应用环境:多媒体教学
  • 制作使用:PowerPoint
  • 应用阶段:通用版本

多聚酶链式反应扩增DNA片段课件ppt介绍

多聚酶链式反应扩增DNA片段课件ppt内容预览:课标领航1.尝试PCR(DNA多聚酶链式反应)技术的基本操作。2.理解PCR的原理和反应过程。3.讨论PCR的应用。重点PCR的原理和反应过程。难点PCR技术的操作过程。情境导引PCR诊断技术又叫多聚酶,链式反应技术,它采用分子技术,模拟核酸在体内的复制,从而判,定疾病病原体的种类,所以从本,质上来说,这是一种分子诊断方法。一、PCR扩增的原理及条件1.概念:PCR即_______________,是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。它能以极少量的_____为模板,在短时间内复制出上百万份的DNA拷贝。2.原理(1)DNA的热变性:在80~100℃的温度范围内,DNA_________结构解体,双链分开,这个过程称为_____。当温度缓慢降低后,两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链。多聚酶链式反应DNA双螺旋变性ppt(2)子链的合成:①需要______;②合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸。3.条件(1)______模板。(2)分别与模板DNA两条链相结合的两种引物。(3)A、T、G、C四种______________。(4)耐热的DNA聚合酶,一般用TaqDNA聚合酶。(5)需要稳定的_____和能严格控制_____的温控设备.引物DNA脱氧核苷酸pH温度二、PCR反应过程PCR一般要经历三十多次循环,每次循环可以分为____、复性和延伸三步。1.变性:当温度上升到______以上时,双链DNA解聚为单链。2.复性:温度下降到_______左右,两种引物通过________________与两条单链DNA结合。3.延伸:温度上升到_____左右,溶液中的四种脱氧核苷酸在_______________的作用下,根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。变性90℃50℃碱基互补配对72℃DNA聚合酶三、实验操作1.实验用具(1)PCR仪:该仪器能自动调控_____,实现DNA的扩增。如果没有PCR仪,可用3个___________代替,操作时按程序在3个水浴锅中来回转移PCR反应的微量离心管。(2)微量离心管:总容积为0.5mL,实际上是进行离心的场所。(3)微量移液器:用于吸取转移PCR配方中的液体,其上的一次性吸液枪头每吸取一种试剂后都要更换。温度恒温水浴锅2.操作步骤准备____混合_____反应。四、操作提示1.为避免外源DNA等因素的污染,实验中使用的一些用具在使用前必须进行__________。2.所用的_________和酶应分装成小份,并在-20℃储存。五、DNA含量的测定1.原理:利用DNA在260nm的紫外线波段的______曲线来测定相应含量。2.计算公式:DNA含量(μg)=50×(260nm的读数)×_____________。移液离心高压灭菌缓冲液吸收稀释倍数1.PCR扩增方向:为了明确地表示DNA的方向,通常将DNA的羟基(—OH)末端称为3′端,而磷酸基团的末端称为5′端。DNA聚合酶不能从头开始合成DNA,而只能从3′端延伸DNA链,即DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸。2.PCR原理——DNA的热变性原理通过控制温度来控制双链的解聚与结合,现在使用的PCR仪实质上也是一台能够自动控制温度的仪器。3.生物体内DNA复制与PCR反应的区别(2011年聊城高二检测)下列关于DNA复制和PCR的描述中,正确的是()A.DNA聚合酶不能从头开始合成DNA,只能从5′端延伸DNA链B.DNA复制不需要引物C.引物与DNA母链通过碱基互补配对进行结合D.PCR扩增的对象是氨基酸序列尝试解答__C__解析由于DNA聚合酶不能从头开始合成DNA,只能从3′端延伸DNA链,故DNA复制需要引物,而且它与DNA母链通过碱基互补配对结合。PCR扩增的对象是DNA,而不是氨基酸。探规寻律(1)引物是一小段DNA或RNA,它能与DNA母链的一段碱基序列互补配对。包括引物Ⅰ和引物Ⅱ两种。用于PCR的引物长度通常为20~30个核苷酸。(2)细胞内DNA复制与PCR技术的原理和过程容易发生混淆,特别应注意区分PCR反应需要可变的温度,而体内DNA复制需要稳定的温度。跟踪训练(2011年海淀区高二检测)关于DNA片段PCR扩增实验的描述中不正确的是()A.加入的TaqDNA聚合酶耐高温

课件关键字:多聚酶链式反应

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